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技術知識

如何更好的使用色譜柱

发布时间: 2019-01-21 14:37   1139 次浏览

1、拿到色譜柱后先阅读说明书,了解色譜柱的具体性能:耐受温度、耐受PH等。以及色譜柱的冲洗和保存条件。经过柱校测试确认色譜柱本身没有问题后方可正常使用。


2、樣品充分前處理,確保樣品的潔淨;使用保護柱或在線過濾器,根據實際情況更換保護柱芯或濾片。


3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。


4、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中如果流動相中使用了緩沖鹽,避免出現鹽析。



5、選擇使用適宜的流動相(尤其是PH),以避免固定相被破壞,PH過低共價鍵斷裂,鍵和相水解;PH過高矽膠溶解。


6、色譜柱使用过程中,如果压力升高,或出现污染,选择适当的条件冲洗或反冲。

 

適用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱体积的含有≥30%谁的极性邮寄溶剂(如乙腈)作为流动相除去柱子中的缓冲盐;使用至少20倍柱体积的含有95%极性邮寄溶剂(如乙腈)冲洗色譜柱。


污染物的去除常规星期后柱校没有明显恢复时,使用50%异丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱体积以除去污染物。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛分针对自己品牌的反相色譜柱冲洗的参考意见)


適用于氨基柱、氰基柱

常规清洗:乙腈:水=60:40条件对色譜柱进行冲洗,清洗时不建议水相比例超过40%,过高使用水相容易导致键和相水解。


色譜柱再生:当色譜柱经过长期使用,柱校降低时,可以对色譜柱进行再生,乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30倍柱体积。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛分针对自己品牌的色譜柱冲洗的参考意见)

 

適用于離子交換柱SCX、SAX沖洗方法

日常沖洗:用100%水沖洗30個柱體積除鹽,然後用20%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積後保存在20%甲醇或乙腈中。


長期保存:用100%水沖洗30個柱體積去除鹽,然後用50%乙腈;50%水沖洗20個柱體積後保存在50%乙腈:50%水中。


再生:先用高浓度的缓冲盐(不超过1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇冲洗,再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛分针对自己品牌的色譜柱冲洗的参考意见)



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